加菌回收试验

平皿倾注法加菌操作微生物计数方法的关键仍然是用天津津腾生产的微生物限定度做加菌回收试验。平皿倾注法的加菌回收试验操作比较统一，一般是将制备好的供试品溶液，按照每管１０ｍＬ分装好，加入含菌量为３０００～１００００ｃｆｕ·ｍＬ－１的菌液１００μＬ，混匀，注皿。

薄膜过滤法加菌操作薄膜过滤法的加菌操作仍存在较大差异。滕钰等对重楼解毒酊、苗药伤科止痛液、伤痛克酊、炉甘石氧化锌洗剂等样品的薄膜过滤采用的是前加菌方式：取１∶１０供试液１０ｍＬ，加入１００μＬ菌液，混匀，再取１０ｍＬ或１ｍＬ供试液过滤，然后再冲洗。

鄢雷娜等对炉甘石粉原料药、芪连降糖片、替硝唑栓、神农蛇药酒等样品的薄膜过滤法采用的是后加菌方式：在最后１００ｍＬ冲洗液中加菌。

庞云娟等和刘康连等关于薄膜过滤研究的加菌方式是在滤杯中先加入约２０ｍＬ稀释液润湿滤膜，再加入１∶１０供试液１０ｍＬ或１ｍＬ，再缓慢地把菌液１ｍＬ（不大于１００ｃｆｕ）分散打进薄膜过滤杯中，抽滤，再冲洗。

由于加菌操作不同，方法的结论差异较大。目前的文献以前加菌和后加菌的占比最多，前加菌的方式导致菌株与供试品溶液提前接触、可能在上样到薄膜过滤器的时候大部分菌已被抑制死，后续的冲洗无法体现出不同冲洗量对抑菌作用消减的差异；而后加菌的方式，所加进去的菌没有参与冲洗的过程。

关于薄膜过滤法的加菌操作应满足以下２点要求：（１）菌液避免与供试品原液或其１∶１０供试液的液体成分提前接触；（２）加进去的菌要参与冲洗的试验过程。可见在第１次冲洗液中加菌的方式相对合理。