2019-11-26 10:15
黑土豆果皮呈黑紫色,该品种富含花青素,花青素除对致癌物质有抑制作用外,还可以增强人体免疫力,延缓衰老,增强体质,增强视力。花青素的检测方法主要有分光光度法、高效液相色谱法。目前,针对黑土豆中花青素提取研究不多,本研究天津津腾实验设备有限公司采用微波辅助、乙醇提取黑土豆中的花青素,高效液相色谱法(HPLC)测定提取液中花青素的含量,在单因素试验的基础上,通过响应面分析法进行优化,确定最优提取条件,为黑土豆在营养保健、食品、医药等领域的应用提供参考依据。
1仪器
LC-20AT高效液相色谱仪、SPD-20A紫外-可见检测器:日本岛津公司;TP150超声波清洗机:天鹏电子新技术(北京)有限公司;GM-0.33A隔膜真空泵(无油):天津市津腾实验设备有限公司;电子分析天平:赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;1000mL溶剂过滤器:天津市津腾实验设备有限公司;Joyoung/九阳V5压榨机:九阳股份有限公司;WTS03-1微波提取器:南京杰全设备公司。
2花青素提取流程
从磨口广口瓶中量取5mL浆汁,置于微波萃取器中,在一定的温度下,按照一定的体积比加入一定浓度的乙醇,提取一定的时间后,提取液冷却至室温后,取澄清滤液,用0.45µm津腾针筒式滤膜,过滤器过滤,滤液于100mL容量瓶中,备用。
3花青素标准曲线的建立
精密称取干燥至恒重的花青素标准品10mg,置于100mL容量瓶中,用无水乙醇定容,配成0.1mg/mL的花青素对照品溶液,摇匀,取澄清滤液,用0.45µm津腾针筒式滤膜,过滤器过滤,滤液于10mL容量瓶中,备用。色谱条件为色谱柱:ShmadzuShim-pack-vpODS(150mm×4.6mm,5µm);柱温:室温;流动相:甲醇(0.02mol/L)-甲酸(95∶5),流速:1.0mL/min;进样量:10μL。准确量取配制好的标准溶液3、6、9、12、15、18mL,转移至100mL容量瓶中,用乙醇定容至刻度,混匀,按色谱条件进行测定,分别记录色谱峰面积,以黑土豆中花青素的质量浓度为横坐标C(mg/mL),色谱峰面积A为纵坐标绘制标准曲线,计算出标准曲线的回归方程。
4结论
对黑土豆中花青素进行微波萃取,通过响应面优化最佳纯化条件,通过HPLC法测得黑土豆中花青素的含量来验证,最后确定微波萃取黑土豆中花青素优化条件为乙醇的浓度60%,料液体积比1∶20,微波辅助提取温度50℃、微波辅助提取时间20min,测得黑土豆中花青素的含量为0.1667mg/mL,与响应面优化时预测值相对误差为0.0026mg/mL,故响应面法确定的工艺条件准确可靠、具有实际应用价值。