微菌落技术用细菌快速定量检测的研究报告较多,我们在研究微菌落技术用于多种食品细菌总数测定中,发现不同性质或品牌微孔滤膜对细菌总数的测定结果有较大影响。为此,我们选择了不同性质的微孔滤膜对细菌总数测定的影响因素进行了实验比较, 以求获得较佳的微孔滤膜。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 微孔滤膜
1.1.2 聚醚砜微孔滤膜孔径﹤0.45μm, 直径47mm, 美国Pall公司生产。
1.1.3 混合纤维素滤膜、醋酸纤维素滤膜。
1.1.4 培养基及染色液营养琼脂、营养肉汤、染色液均, 效期内使用。
1.1.5 抽滤系统AutoScience 。
1.1.6 多媒体彩显显微诊断仪XS-2100日本产, 。
1.1.7 标准菌株 大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌。
1.1.8 固定液 本实验室自制,按比例进行,乙醇:冰醋酸=91。
1.1.9 食品标本 随机抽取市售的食品10份( 编号1～2饮料;3～4糕点;5～6牛奶;7～8豆制品;9～10肉制品) 。
1.2 方法
1.2.1 不同微孔滤膜对标准菌株的重复性试验 将大肠埃希氏菌制备成1.5×102cfu/ml浓度, 用3种微孔滤膜与国标营养琼脂法重复测定5次。
1.2.2 回收试验 将大肠埃希氏菌ATCC8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538分别制成5种不同浓度的细菌悬液加入同一食品用3种滤膜分别测定其每ml中的cfu。
1.2.3 不同食品标本比对试验 取市售食品10份(饮料2份;糕点2份;牛奶2份;豆制品2份;肉制品2份) 。分别用3种滤膜测定其cfu,用国标法比对。
1.2.4 滤膜透明固定处理后的复性观察 将混合纤维素滤膜与醋酸纤维素滤膜用透明固定液处理1min后观察其复性状况。
2 结果
2.1 3种微孔滤膜法对大肠埃希氏菌重复试验3种微孔滤膜对相同浓度的大肠埃希氏菌的测定, 具有很好的重复性。
2.2 不同的微孔滤膜对大肠埃希氏菌和金葡菌的回收率3种不同滤膜对大肠埃希氏菌和金葡菌的回收率均在95%～105%之间,3者之间无差异, 符合实验要求。
2.3 3种微孔滤膜与国标法测定食品中细菌总数的结果将市售的5类10份食品中分别用3种滤膜与国标法平行测定其细菌总数, 经统计学分析,3种滤膜测定的结果与国标法结果差异无统计学意义, 。
2.4 透明固定液处理后的滤膜复性聚醚砜微孔滤膜为进口单独灭菌包装不需作透明处理, 将混合纤维素滤膜, 醋酸纤维素滤膜用透明处理后, 混合纤维素滤膜不易复性, 透明, 清晰, 观察结果方便, 而醋酸纤维素滤膜处理后清晰度较好, 但易于复性, 对结果观察有些影响。
3 讨论
食品中细菌总数微菌落多媒体快速检测技术的研究, 对强化食品安全工作意义十分重要, 有利于快速鉴定食品的安全性, 但微菌落技术的主要关键是结果是否准确, 而滤膜的性能与质量将直接影响其检测结果, 本次试验表, 聚醚砜微孔滤膜
为进口单独灭菌包装, 性能与检测结果具有不需作透明处理,易于观察等优点, 且结果与国标法基本一致, 而且操作简便,是微菌落技术首选滤膜, 但价格较贵, 成本较高, 有条件的单位可选用之, 混合纤维素滤膜和醋酸纤维素滤膜在试验时其结
果虽与国标法结果无明显差异, 但醋酸纤维素滤膜经透明处理易于复性, 观察结果时有较明显影响, 混合纤维素滤膜则不易复性, 加热固定易于菌体结合, 透明度和清晰度与聚醚砜微孔滤膜相似, 而且混合纤维素滤膜是国产, 价格较低, 是基层实验室较佳的选择。
